Anticorpos fragmentados
Os anticorpos secundários são anticorpos que se ligam a anticorpos primários ou a fragmentos de anticorpos.
Os anticorpos secundários fragmentados são anticorpos que foram digeridos enzimaticamente para remover a região Fc do anticorpo, deixando apenas os fragmentos Fab ou F(ab')2 de ligação ao antigénio.
Estes fragmentos são monovalentes ou divalentes, respetivamente, e podem ser utilizados para bloquear imunoglobulinas endógenas em células, tecidos ou outras superfícies, e para bloquear as imunoglobulinas expostas em experiências de marcação múltipla utilizando anticorpos primários da mesma espécie. Podem também ser utilizados para marcar anticorpos primários antes da incubação com a amostra experimental. As vantagens da utilização de anticorpos secundários fragmentados incluem a eliminação da ligação não específica entre as porções Fc dos anticorpos e os receptores Fc nas células, facilitando uma melhor penetração do antigénio no tecido e reduzindo o fundo da ligação do anticorpo primário em experiências de dupla coloração.
As vantagens da utilização de anticorpos secundários de fragmentos Fab incluem:
- Eliminar a ligação não específica entre as porções Fc dos anticorpos e os receptores Fc nas células, o que é particularmente importante quando se trabalha com células vivas.
- Facilitar uma melhor penetração do antigénio no tecido, o que é importante para experiências de imunohistoquímica (IHC).
- Reduzir o fundo da ligação do anticorpo primário em experiências de dupla coloração.
- Permitir a conjugação direta com marcadores detectáveis através dos seus grupos sulfidrilo, assegurando que o local de ligação ativo do anticorpo não é afetado.
