Affiniteitsharsen voor antilichamen
De basis voor de zuivering van IgG, IgG-fragmenten en subklassen is de hoge affiniteit van eiwit A (een celwandeiwit afkomstig van Staphylococcus aureus) en eiwit G (afkomstig van groep C- en G-streptokokken) voor het Fc-gedeelte van polyklonale en monoklonale IgG-antilichamen. Eiwit A kan worden gebruikt om monoklonale en polyklonale IgG uit ascites, serum, en supernatanten van celkweek en bioreactoren te isoleren. Zuivering met eiwit A wordt aanbevolen voor menselijke (behalve IgG3; muis IgG1 kan slechts zwak binden), konijnen-, cavia- en varkensantilichamen. Het antilichaam wordt toegevoegd aan een eiwit A–Sepharose kolom bij pH 8,0, gevolgd door eluatie bij een lagere pH.
Eiwit G heeft een bindingsprofiel dat tegengesteld is aan dat van eiwit A met betrekking tot pH: antilichamen binden beter bij lage pH en slecht bij hoge pH. Sommige antilichamen (muis IgG1 en konijnen- en humane antilichamen) blijven echter gebonden aan eiwit G bij hoge pH (8 tot 10), dus het is het beste om het antilichaam te binden bij pH 5 en te elueren bij pH 2,8. Deze methode is nuttig voor muis IgG1, rat (de meeste subklassen binden zwak, hoewel IgG2b mogelijk niet), aap, konijn, koe, geit, paard en schaap.
