Resinas de afinidade para anticorpos

A base para a purificação de IgG, fragmentos de IgG e subclasses é a alta afinidade da proteína A (proteína da parede celular derivada de Staphylococcus aureus) e da proteína G (derivada de estreptococos dos grupos C e G) pela região Fc de anticorpos IgG policlonais e monoclonais. A proteína A pode ser usada para isolar IgG monoclonal e policlonal de ascite, soro, cultura de tecidos e sobrenadantes de biorreatores. A purificação com proteína A é recomendada para anticorpos humanos (exceto IgG3; a IgG1 de camundongo pode ligar-se apenas fracamente), de coelho, porquinho-da-índia e porco. O anticorpo é adicionado a uma coluna de Sepharose–proteína A a pH 8,0, seguida por eluição em pH mais baixo.

A proteína G apresenta um perfil de ligação oposto ao da proteína A em relação ao pH: os anticorpos ligam-se melhor em pH baixo e mal em pH alto. No entanto, alguns anticorpos (IgG1 de camundongo e anticorpos de coelho e humanos) permanecem ligados à proteína G mesmo em pH alto (8 a 10), portanto é melhor ligar o anticorpo em pH 5 e eluí-lo em pH 2,8. Este método é útil para IgG1 de camundongo, rato (a maioria das subclasses liga-se fracamente, embora IgG2b possa não), macaco, coelho, vaca, cabra, cavalo e ovelha.