Elettroforesi delle proteine è una tecnica di elettroforesi su gel che consente l'analisi di una miscela di proteine. Il gel utilizzato è composto da acrilammide, che polimerizza per formare una rete a maglie. L'elettroforesi su gel permette di separare le proteine per l'analisi e si basa sulla capacità delle proteine cariche di migrare attraverso la rete di un gel quando viene applicata una corrente elettrica.
L'analisi di una miscela mediante elettroforesi su gel viene eseguita su proteine denaturate, ovvero proteine che hanno perso la loro struttura terziaria e secondaria. Un detergente anionico ricopre le catene polimeriche denaturate, conferendo loro una carica (rapporto carica costante/amminoacido). Le proteine individuali in una miscela complessa vengono così rivestite con cariche negative. Quando viene applicata una tensione continua tra le estremità di un gel contenente la miscela di proteine, le proteine migrano attraverso le maglie del gel.
Principi di Separazione
- Peso Molecolare: La rete del gel trattiene più le molecole più grandi rispetto a quelle più piccole. Le molecole con peso molecolare inferiore migrano più velocemente attraverso il gel.
- Densità del Gel: La risoluzione della separazione può essere regolata utilizzando gel con diverse densità di rete.
- Marcatore di Peso Molecolare: Utilizzato durante la migrazione per fornire una scala di riferimento, consentendo di determinare la dimensione di ogni proteina.
Visualizzazione delle Proteine
Dopo la migrazione, le proteine vengono visualizzate utilizzando colorazioni specifiche. La colorazione più comunemente usata è il blu Coomassie, ma è possibile anche la colorazione con argento. I marcatori di peso molecolare aiutano a determinare la dimensione delle proteine nella miscela.
