Affinitätsharze für Antikörper

Die Grundlage für die Reinigung von IgG, IgG-Fragmenten und Subklassen ist die hohe Affinität von Protein A (Zellwandprotein, abgeleitet von Staphylococcus aureus) und Protein G (abgeleitet von Gruppen-C- und -G-Streptokokken) zur Fc-Region polyklonaler und monoklonaler IgG-Antikörper. Protein A kann verwendet werden, um monoklonales und polyklonales IgG aus Aszites, Serum, Zellkultur- und Bioreaktorsupernatanten zu isolieren. Die Reinigung mit Protein A wird für menschliche (außer IgG3; Maus-IgG1 bindet möglicherweise nur schwach), Kaninchen-, Meerschweinchen- und Schweineantikörper empfohlen. Die Antikörper werden einer Protein-A–Sepharose-Säule bei pH 8,0 zugegeben und anschließend bei einem niedrigeren pH-Wert eluieren.

Protein G hat ein entgegengesetztes Bindungsprofil zu Protein A in Bezug auf den pH-Wert: Antikörper binden besser bei niedrigem pH-Wert und schlecht bei hohem pH-Wert. Einige Antikörper (Maus-IgG1 sowie Kaninchen- und menschliche Antikörper) bleiben jedoch auch bei hohem pH-Wert (8 bis 10) an Protein G gebunden, daher ist es am besten, den Antikörper bei pH 5 zu binden und bei pH 2,8 zu eluieren. Diese Methode ist nützlich für Maus-IgG1, Ratte (die meisten Subklassen binden schwach, obwohl IgG2b möglicherweise nicht), Affe, Kaninchen, Kuh, Ziege, Pferd und Schaf.