Resine di affinità per anticorpi
La base per la purificazione di IgG, frammenti di IgG e sottoclassi è l'elevata affinità della proteina A (una proteina della parete cellulare derivata da Staphylococcus aureus) e della proteina G (derivata da Streptococchi dei gruppi C e G) per la regione Fc degli anticorpi IgG policlonali e monoclonali. La proteina A può essere utilizzata per isolare IgG monoclonali e policlonali da ascite, siero e surnatanti di colture cellulari e bioreattori. La purificazione con proteina A è raccomandata per anticorpi umani (eccetto IgG3; la IgG1 murina può legarsi solo debolmente), di coniglio, porcellino d'India e maiale. L'anticorpo viene aggiunto a una colonna di Sepharose–proteina A a pH 8,0, seguito da eluizione a pH più basso.
La proteina G ha un profilo di legame opposto rispetto alla proteina A in funzione del pH: gli anticorpi si legano meglio a pH basso e male a pH alto. Tuttavia, alcuni anticorpi (IgG1 murina, e anticorpi di coniglio e umani) rimangono legati alla proteina G anche ad alto pH (8–10), quindi è preferibile legare l'anticorpo a pH 5 ed eluirlo a pH 2,8. Questo metodo è utile per IgG1 di topo, ratto (la maggior parte delle sottoclassi si lega debolmente, sebbene IgG2b possa non farlo), scimmia, coniglio, mucca, capra, cavallo e pecora.
