Kreuzadsorbierte Sekundärantikörper
Bei kreuzadsorbierten sekundären Antikörpern handelt es sich um polyklonale Antikörper, die einem zusätzlichen Reinigungsschritt, der so genannten Kreuzadsorption, unterzogen wurden, um die Mitglieder herauszufiltern, die an Off-Target-Spezies von Immunglobulinen (IgG) binden.
Bei der Kreuzadsorption werden die Antikörper durch Bindung an Zielproteine, die auf Festphasengelen immobilisiert wurden, aus dem Antiserum isoliert. Die für die Kreuzadsorption verwendeten Gele können Proteine verschiedener Spezies, verschiedener Maus-IgG-Unterklassen oder verschiedener Antikörperfragmente enthalten. Die kreuzadsorbierten sekundären Antikörper weisen eine minimale Kreuzreaktivität mit diesen Spezies auf, unabhängig davon, ob sie von den experimentellen Antikörpern oder von endogenen Proteinen in der Probe stammen. Präadsorption, ein anderer Begriff für Kreuzadsorption, ist ein zusätzlicher Reinigungsschritt, der zur Erhöhung der Spezifität eines sekundären Antikörpers eingeführt wird.
Die Kreuzadsorption von Sekundärantikörpern wird empfohlen, um den Nachweis von Immunglobulinen zu vermeiden, die nicht das beabsichtigte Ziel in vielen Immunotechniken sind, die Antikörper aus mehreren Spezies im Testsystem erfordern, wie ELISA, Durchflusszytometrie oder IHC. Eine effiziente Kreuzadsorption kann durch die Verwendung einer hohen Konzentration des immobilisierten Antigens und einer langen Inkubationszeit erreicht werden.
