Fosfofrutoquinase (PFK) é uma enzima regulatória fundamental na glicólise, catalisando a conversão de frutose-6-fosfato em frutose-1,6-bisfosfato. A medição precisa da atividade da PFK é essencial para estudar o metabolismo energético celular e sua desregulação em doenças como câncer e distúrbios metabólicos.

Papel Biológico da Fosfofrutoquinase

A PFK catalisa a fosforilação de frutose-6-fosfato utilizando ATP, produzindo frutose-1,6-bisfosfato e ADP—uma etapa praticamente irreversível que compromete a glicose para a glicólise. Essa reação é altamente regulada por efetores alostéricos, incluindo ATP (inibidor), AMP (ativador) e frutose-2,6-bisfosfato, sendo este último um potente ativador que vincula a glicólise a sinais hormonais e nutricionais. A PFK existe em múltiplas isoformas (PFK-M, PFK-L, PFK-P), refletindo as demandas metabólicas específicas dos tecidos.

Princípio e Metodologia do Ensaio

Os kits de ensaio de atividade da PFK geralmente empregam uma reação enzimática acoplada. A PFK converte frutose-6-fosfato e ATP em frutose-1,6-bisfosfato e ADP. O ADP produzido é processado por uma mistura enzimática para gerar AMP e NADH. A diminuição do NADH é monitorada colorimetricamente, geralmente a 340 nm, ou via a formação de um produto colorido com forte absorção a 450 nm. Isso permite a detecção quantitativa e sensível da atividade da PFK em várias amostras biológicas, incluindo soro, plasma, tecidos e células cultivadas.

Aplicações em Pesquisa e Diagnóstico

• Estudos Metabólicos: Os ensaios de atividade da PFK são amplamente utilizados para avaliar o fluxo glicolítico e o metabolismo energético na saúde e na doença.
• Diagnóstico de Doenças: A deficiência de atividade da PFK está associada à doença de armazenamento de glicogênio tipo VII (doença de Tarui), enquanto a atividade elevada está relacionada à proliferação de células cancerígenas.
• Triagem de Medicamentos: Esses ensaios são valiosos para triagem de compostos que modulam a glicólise, com implicações para a pesquisa sobre câncer e síndrome metabólica.

Características do Kit de Ensaio

• Sensibilidade: Detecção em baixas concentrações, permitindo a análise de amostras com baixa abundância.
• Velocidade: O tempo dos ensaios varia de 15 a 30 minutos, facilitando estudos de alto rendimento.
• Versatilidade de Amostras: Compatível com uma ampla gama de tipos de amostras, incluindo tecidos animais e células cultivadas.
• Precisão: Baixa variabilidade intra- e interensaios garante reprodutibilidade.

Os kits de ensaio de atividade da fosfofrutoquinase fornecem uma maneira robusta, sensível e rápida de investigar um ponto regulador central no metabolismo intermediário. Sua aplicação abrange pesquisas metabólicas básicas, diagnóstico de doenças e descoberta de medicamentos, destacando a importância da enzima na fisiologia e patologia celular.