Hibridização in situ fluorescente (FISH) é uma técnica citogenética molecular fundamental que permite a detecção e localização de sequências específicas de DNA em cromossomos, facilitando análises genéticas precisas em contextos de pesquisa e clínicos.
Princípios da FISH
A FISH envolve o uso de sondas de DNA ou RNA marcadas com fluorescência que são complementares às sequências de interesse. Essas sondas são desnaturalizadas e, em seguida, hibridizadas a DNA cromossômico desnaturalizado ou núcleos fixados em lâminas microscópicas. Após a ligação (hibridização), as lâminas são lavadas para remover sondas excedentes, e as sondas hibridizadas são visualizadas usando microscopia de fluorescência. Os locais de hibridização específicos aparecem como sinais brilhantes, correspondendo à localização das sequências de DNA alvo.
Aplicações em citogenética
A FISH revolucionou a análise citogenética ao oferecer vantagens únicas sobre as técnicas de bandeamento tradicionais:
- Detecção de anomalias numéricas e estruturais: Permite a identificação de deleções, duplicações, inversões, translocações e aneuploidias em células tanto em metáfase quanto em interfase.
- Diagnóstico oncológico: Usada na detecção e caracterização de alterações cromossômicas associadas a malignidades hematológicas e tumores sólidos, mesmo em amostras inadequadas para cariotipagem convencional, como tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina.
- Diagnóstico pré-natal e pós-natal: Permite uma avaliação rápida de anomalias cromossômicas em células fetais obtidas de amniocentese ou amostragem de vilosidades coriônicas.
- Mapeamento genético e organização do genoma: Facilita a atribuição de genes a localizações cromossômicas específicas.
- Detecção de microdeleções e rearranjos crípticos: Identifica alterações submicroscópicas indetectáveis por análise de cariótipo padrão.
Vantagens principais
Pode ser realizada em células não divididas (em interfase), permitindo a análise de amostras inacessíveis para citogenética padrão.
Permite o uso simultâneo de múltiplas sondas fluorescentes, proporcionando imagens multicoloridas detalhadas de vários alvos dentro de uma única célula.
Alta sensibilidade e especificidade para sequências alvo.
Hibridização in situ fluorescente continua sendo um padrão ouro para análise citogenética direcionada, oferecendo alta resolução, flexibilidade e valor diagnóstico que continua a expandir os limites da pesquisa genômica e da medicina personalizada.
