Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) é uma forma especializada de cromatografia líquida amplamente utilizada para análise e purificação de proteínas e outras macromoléculas biológicas. Desenvolvida originalmente pela Pharmacia em 1982, a FPLC foi projetada como uma técnica cromatográfica de pressão média otimizada para biomoléculas, especialmente proteínas, que são sensíveis a condições severas, como alta pressão, pH extremo e solventes orgânicos.
Princípios e Mecanismo
A FPLC separa os componentes de uma mistura com base em suas afinidades diferenciais entre uma fase móvel e uma fase estacionária. A fase móvel na FPLC é uma solução aquosa de tampão, cuja taxa de fluxo é controlada com precisão por uma bomba de deslocamento positivo, normalmente mantida em 1–5 mL/min sob baixa pressão (abaixo de 5 bar). A fase estacionária consiste em esferas de resina porosa, geralmente agarose entrecruzada, embaladas em colunas. Essas esferas variam em tamanho e química de superfície, dependendo do tipo de separação exigida.
Aplicações
- Purificação de proteínas recombinantes, anticorpos e enzimas.
- Isolamento de ácidos nucleicos como oligonucleotídeos e plasmídeos.
- Preparação de proteínas para estudos estruturais e funcionais.
- Remoção de contaminantes, como endotoxinas, de preparações de proteínas.
Vantagens
- Condições operacionais suaves: Baixa pressão e tampões aquosos evitam a desnaturação de proteínas.
- Alta resolução e reprodutibilidade: Tamanhos pequenos de esferas e controle preciso de fluxo aprimoram a qualidade da separação.
- Automação: Facilita a eluição por gradiente, o manuseio de amostras e a coleta de frações.
- Escalabilidade: Adequado para purificação em escala analítica, preparativa ou industrial.
- Versatilidade: Compatível com múltiplos modos cromatográficos e tipos de amostras biológicas.
A FPLC representa uma técnica fundamental na bioquímica de proteínas e biologia molecular, oferecendo uma plataforma robusta, suave e versátil para a purificação e análise de proteínas. Seu desenvolvimento facilitou consideravelmente a produção de proteínas de alta pureza essenciais para pesquisa, diagnóstico e aplicações terapêuticas.
