Eletroforese em gel de proteínas é uma técnica fundamental para separar proteínas com base em seu tamanho e carga, e pode ser realizada em géis de agarose ou géis de acrilamida. O último é mais comumente usado na análise de proteínas e é especificamente referido como eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE).

PAGE usa uma matriz de gel de acrilamida reticulada formada pela polimerização de monômeros de acrilamida na presença de bis-acrilamida, que atua como agente de reticulação. Essa reação de polimerização é catalisada por persulfato de amônio (APS) e TEMED (N,N,N′,N′-tetrametiletilenodiamina). APS gera radicais livres que iniciam a polimerização, enquanto o TEMED acelera esse processo. O resultado é uma rede tridimensional de malha cujo tamanho de poro depende da concentração total de acrilamida e bis-acrilamida.

Efeito da concentração de acrilamida

A concentração de acrilamida influencia diretamente o tamanho dos poros do gel e, portanto, suas propriedades de peneiramento. Percentuais mais baixos de acrilamida (geralmente 4–8 %) formam géis com poros maiores, que permitem que proteínas maiores migrem mais livremente através da matriz. Por outro lado, percentuais mais altos (cerca de 12–20 %) produzem géis com poros menores, restringindo a passagem de proteínas grandes e melhorando a resolução de proteínas menores. Esse tamanho de poro ajustável é crucial para adaptar o gel ao intervalo de tamanho molecular das proteínas de interesse.

Tipos de géis de acrilamida

• Géis uniformes: Mantêm uma concentração constante de acrilamida ao longo de seu comprimento; mais simples de preparar e adequados quando o intervalo de tamanho de proteínas é estreito.
• Géis de gradiente: Apresentam um aumento contínuo na concentração de acrilamida do topo para a base, criando uma malha que se aperta gradualmente. Isso permite a resolução simultânea de uma ampla gama de proteínas – de alto peso molecular a baixo peso molecular – no mesmo gel.

Em resumo, géis de acrilamida se comportam como peneiras moleculares em PAGE, onde o grau de polimerização e a concentração de acrilamida determinam o tamanho da malha e controlam a migração de proteínas. Ao selecionar o percentual de gel ou gradiente apropriado, os pesquisadores podem otimizar a eletroforese para alcançar uma melhor resolução adaptada aos tamanhos das proteínas sob estudo. Essa flexibilidade torna a PAGE um método altamente versátil e amplamente utilizado em proteômica e biologia molecular.