Cromatografia de Afinidade baseia-se na ligação específica e reversível de uma proteína a um ligante ligado à matriz, que então é chamado de resina de afinidade. O ligante pode se ligar diretamente à proteína de interesse ou a uma etiqueta covalentemente ligada à proteína (Histidina, GST ...). A cromatografia de afinidade é frequentemente o procedimento de purificação mais robusto e geralmente é usada nas primeiras etapas do processo de purificação. Dependendo da aplicação posterior, a purificação por afinidade pode ser a única etapa cromatográfica necessária para atingir a pureza adequada.
As proteínas podem ser purificadas por cromatografia de afinidade de maneira seletiva ou não seletiva. Na cromatografia de afinidade seletiva, utiliza-se um ligante específico para uma proteína covalentemente ligada ou etiqueta. Na cromatografia de afinidade não seletiva, como Protein A, G, L para imunoglobulinas, ou heparina para proteínas de ligação a DNA, ou lectina para glicoproteínas, o ligante se liga a um grupo de proteínas com capacidades de ligação semelhantes.
Resinas disponíveis:
- Nickel-NTA: para purificação de proteínas marcadas com polihistidina
- Cobalt-NTA: para purificação de proteínas marcadas com polihistidina
- GST: para purificação de proteínas marcadas com GST
- Protein A: para purificação de anticorpos
- Protein G: para purificação de anticorpos
