Eiwitproductie en -zuivering in een prokaryotisch systeem
We kunnen verschillende hoeveelheden recombinant produceren afhankelijk van uw project. Deze productie verloopt in twee stappen:
1- test van recombinant expressie: om de haalbaarheid van de aanvraag te controleren
2- grootschalige productie en zuivering van het recombinant eiwit
Stap 2 wordt gestart nadat de gegevens van stap 1 zijn geanalyseerd en de klant de resultaten heeft goedgekeurd.
Stap 1 - Standaardprotocol voor het testen van de recombinant expressie:
- Transformatie van hoogrenderende bacteriën
- Kweek van bacteriën (onder kweekcondities afhankelijk van de vereiste hoeveelheden)
- Inductie van recombinant synthese (kinetiek van 5 uur)
- Affiniteitszuivering op specifieke hars
- Analyse van lysaten op gel
Opties: Analyse 1- van recombinant oplosbaarheid 2- van productierendement
Stap 2 - Standaardprotocol voor de grootschalige productie en zuivering van het recombinant:
- Kweek van bacteriën
- Inductie van recombinant synthese (onder kweekcondities vooraf gedefinieerd in stap 1)
- Bereiding van bacteriële lysaten
- Affiniteitszuivering op specifieke hars
- Optie: Verwijdering van tag (bijv.: enzymatische splitsing van GST-Tag)
Opmerking: De eindhoeveelheid recombinant eiwit kan niet gegarandeerd worden.
Belangrijke cijfers:
- Kweekvolume: Stap 1: 300 ml / Stap 2: 1 liter
- Kinetiek van recombinant expressie: 5 uur
- Duur van het protocol: Stap 1: 10 dagen / Stap 2: 5 dagen
Gerelateerde beschikbare diensten:
=> Gen synthese
=> Gen cloning
=> Polyclonale productie
=> Monoclonale productie
