Affiniteitsharsen voor GST-gelabelde eiwitten

Glutathion S-transferase (GST) is een 211 aminozuur eiwit (26 kDa) waarvan de DNA-sequentie vaak wordt geïntegreerd in expressievectoren voor de productie van recombinante eiwitten. Het resultaat van de expressie van deze vector is een GST-gemerkte fusie-eiwit, waarbij het functionele GST-eiwit (26 kDa) is gefuseerd met de N-terminus van het recombinante eiwit.

Aangezien GST snel opvouwt tot een stabiel en zeer oplosbaar eiwit na vertaling, bevordert de opname van de GST-tag vaak een grotere expressie en oplosbaarheid van recombinante eiwitten dan expressie zonder de tag. Bovendien kunnen GST-gemerkte fusie-eiwitten worden gepurificeerd of gedetecteerd op basis van het vermogen van GST (een enzym) om te binden aan zijn substraat, glutathion (GSH).

Affiniteitschromatografie met glutathion-agarose maakt snelle, milde, niet-denaturerende en hoogselectieve zuivering van eiwitten mogelijk die glutathionbindende sequenties bevatten, zoals Glutathion S-Transferase (GST), glutathion peroxidase en glyoxalase I.

De elutie van het GST-gemerkte eiwit wordt uitgevoerd met vrij glutathion in het elutiebuffer. De affiniteit van Glutathion-S-Transferase voor vrij glutathion is hoger dan voor het geïmmobiliseerde glutathion dat aan de agarose-matrix is gebonden. Daarom vervangt vrij glutathion het geïmmobiliseerde glutathion, wat leidt tot de vrijgave van het GST-gemerkte eiwit uit de matrix.