Proteïne-elektroforese is een gelelektroforese-techniek die de analyse van een mengsel van eiwitten mogelijk maakt. Het gebruikte gel bestaat uit acrylamide, dat polymeriseert om een maasnetwerk te vormen. Gelektroforese maakt het mogelijk om eiwitten te scheiden voor analyse en vertrouwt op de mogelijkheid van geladen eiwitten om door het maaswerk van een gel te migreren wanneer een elektrische stroom wordt toegepast.
De analyse van een mengsel door gelelektroforese wordt uitgevoerd op gedentatureerde eiwitten, d.w.z. eiwitten die hun tertiaire en secundaire structuren hebben verloren. Een anionisch detergent bedekt de gedentatureerde polymeer-ketens, waardoor ze een lading krijgen (constante lading/aminozuurverhouding). Individuele eiwitten in een complex mengsel worden dus bedekt met negatieve ladingen. Wanneer een continue spanning wordt aangelegd tussen de uiteinden van een gel dat het eiwitmengsel bevat, migreren de eiwitten door de gelmaasjes.
Principes van Scheiding
- Moleculair Gewicht: Het gelmaaswerk houdt grotere moleculen meer vast dan kleinere. Moleculen met lager moleculair gewicht migreren sneller door het gel.
- Gel-Dichtheid: De scheidingsresolutie kan worden aangepast door gels met verschillende maaswerkdichtheden te gebruiken.
- Moleculair Gewicht Marker: Wordt gebruikt tijdens de migratie om een referentieschaal te bieden, waardoor de grootte van elk eiwit kan worden bepaald.
Visualisatie van Eiwitten
Na migratie worden eiwitten gevisualiseerd met behulp van specifieke kleurstoffen. De meest gebruikte kleurstof is Coomassie-blauw, maar zilverkleuring is ook mogelijk. Moleculair gewicht markers helpen bij het bepalen van de grootte van eiwitten in het mengsel.
