Affiniteitschromatografie is gebaseerd op de specifieke en reversibele binding van een eiwit aan een ligandsubstantie die aan de matrix is gebonden, die vervolgens als een affiniteitsresin wordt aangeduid. Het ligand kan direct binden aan het eiwit van interesse of aan een tag die covalent aan het eiwit is gehecht (Histidine, GST ...). Affiniteitschromatografie is vaak de robuuste zuiveringsmethode en wordt meestal gebruikt in de vroege stadia van het zuiveringsproces. Afhankelijk van de downstreamtoepassing kan affiniteitszuivering de enige chromatografische stap zijn die nodig is om de vereiste zuiverheid te bereiken.
De eiwitten kunnen op een selectieve of niet-selectieve manier worden gezuiverd door affiniteitschromatografie. In de selectieve affiniteitschromatografie wordt een ligand gebruikt dat specifiek is voor een covalent verbonden eiwit of tag. In de niet-selectieve affiniteitschromatografie, zoals Protein A, G, L voor immunoglobulinen, of heparine voor DNA-bindende eiwitten, of lectine voor glycoproteïnen, bindt het ligand zich aan een groep eiwitten met vergelijkbare bindingsmogelijkheden.
Beschikbare harsen:
- Nickel-NTA: voor de zuivering van poly-histidine getagde eiwitten
- Cobalt-NTA: voor de zuivering van poly-histidine getagde eiwitten
- GST: voor de zuivering van GST getagde eiwitten
- Protein A: voor de zuivering van antilichamen
- Protein G: voor de zuivering van antilichamen
