Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) is een gespecialiseerde vorm van vloeistofchromatografie die veel wordt gebruikt voor de analyse en zuivering van eiwitten en andere biologische macromoleculen. Oorspronkelijk ontwikkeld door Pharmacia in 1982, werd FPLC ontworpen als een chromatografische techniek met middelhoge druk, geoptimaliseerd voor biomoleculen, vooral eiwitten, die gevoelig zijn voor extreme omstandigheden zoals hoge druk, extreem pH en organische oplosmiddelen.
Principes en Mechanisme
FPLC scheidt de componenten van een mengsel op basis van hun verschillende affiniteiten tussen een mobiele fase en een stationaire fase. De mobiele fase in FPLC is een aquatische buffervloeistof, waarvan de doorstroomsnelheid nauwkeurig wordt gecontroleerd door een positieve verplaatsingspomp, die meestal wordt gehandhaafd bij 1–5 mL/min onder lage druk (minder dan 5 bar). De stationaire fase bestaat uit poreuze harsbolletjes, vaak gekruist agarose, verpakt in kolommen. Deze bolletjes variëren in grootte en oppervlaktechemie, afhankelijk van het type scheiding dat nodig is.
Toepassingen
- Zuivering van recombinante eiwitten, antilichamen en enzymen.
- Isolatie van nucleïnezuren zoals oligonucleotiden en plasmiden.
- Voorbereiding van eiwitten voor structurele en functionele studies.
- Verwijdering van verontreinigingen zoals endotoxinen uit eiwitbereidingen.
Voordelen
- Zachte bedrijfsomstandigheden: Lage druk en aquatische buffers voorkomen denaturatie van eiwitten.
- Hoge resolutie en reproduceerbaarheid: Kleine bolgroottes en nauwkeurige doorstroomregeling verbeteren de kwaliteit van de scheiding.
- Automatisering: Vergemakkelijkt gradientelutie, monsterbehandeling en fractieverzameling.
- Schaalbaarheid: Geschikt voor analytische, preparatieve of industriële schaalzuivering.
- Veelzijdigheid: Compatibel met meerdere chromatografische modi en biologische monstertypes.
FPLC vertegenwoordigt een hoeksteen techniek in de eiwitbiochemie en moleculaire biologie, die een robuuste, zachte en veelzijdige platform biedt voor eiwitzuivering en analyse. De ontwikkeling ervan heeft de productie van eiwitten van hoge zuiverheid, essentieel voor onderzoek, diagnostiek en therapeutische toepassingen, aanzienlijk vergemakkelijkt.
