La piruvato chinasi (PK) è un enzima cruciale nel metabolismo intermedio, che catalizza l’ultimo passaggio della glicolisi: il trasferimento di un gruppo fosfato dal fosfoenolpiruvato (PEP) all’ADP, producendo piruvato e ATP. Questa reazione è fondamentale per la produzione di energia cellulare e la regolazione metabolica. L’attività della PK è strettamente controllata sia nelle vie glicolitiche che gluconeogeniche. La misurazione dell’attività della PK fornisce importanti informazioni sulla salute metabolica, gli stati patologici e gli effetti dei farmaci.

Principio del Saggio della Piruvato Chinasi

I kit per il saggio della piruvato chinasi sono progettati per una quantificazione semplice, diretta e ad alto rendimento dell’attività della PK in campioni biologici quali siero, plasma, tessuti e lisati cellulari. Il saggio standard prevede la reazione enzimatica:

PEP + ADP → Piruvato chinasi → Piruvato + ATP

Il piruvato prodotto viene quindi rilevato tramite metodi colorimetrici o fluorimetrici. Nei saggi colorimetrici, una reazione accoppiata con un reagente sviluppatore produce un cambiamento di colore; nei saggi fluorimetrici, la fluorescenza viene misurata a Ex/Em = 530/590 nm. L’intensità del segnale è direttamente proporzionale all’attività della PK nel campione.

Applicazioni nel Metabolismo Intermedio

• Glicolisi e Gluconeogenesi: L’attività della PK è centrale nella glicolisi, influenzando la produzione di ATP e la disponibilità di piruvato. Essa svolge inoltre un ruolo regolatorio nella gluconeogenesi, dove la sua inibizione è necessaria per prevenire cicli inutili e garantire una produzione efficiente di glucosio.
• Ricerca sulle Malattie Metaboliche: La carenza di PK compromette la glicolisi ed è associata ad anemia emolitica e ad altri disturbi metabolici.
• Screening di Farmaci: Questi saggi consentono di valutare composti che modulano l’attività della PK, facilitando la scoperta di regolatori metabolici o terapeutici.
• Analisi del Flusso Metabolico: Quantificando l’attività della PK, i ricercatori possono dedurre cambiamenti nel flusso metabolico in diverse condizioni fisiologiche o patologiche.

Caratteristiche e Protocolli del Saggio

• Sensibilità e Gamma: I kit rilevano tipicamente l’attività della PK a basse concentrazioni, adatti alla maggior parte dei campioni biologici.
• Tipi di Campioni: Compatibile con plasma, siero, cellule e tessuti di varie specie.
• Durata del Saggio: La maggior parte dei protocolli può essere completata in 30-40 minuti.
• Conservazione e Stabilità: I kit si conservano a -20°C e rimangono stabili per 6-12 mesi.

I kit per il saggio della piruvato chinasi sono strumenti indispensabili nello studio del metabolismo intermedio, permettendo un’analisi sensibile e quantitativa di un enzima metabolico chiave. Facilitando la ricerca su glicolisi, gluconeogenesi e regolazione metabolica, questi kit supportano progressi sia nella scienza di base che nella diagnostica clinica.