Resine di affinità per proteine marcate con GST

La Glutatione S-transferasi (GST) è una proteina di 211 aminoacidi (26 kDa) la cui sequenza di DNA è frequentemente integrata in vettori di espressione per la produzione di proteine ricombinanti. Il risultato dell'espressione di questo vettore è una proteina di fusione con etichetta GST, in cui la proteina funzionale GST (26 kDa) è fusa al N-terminale della proteina ricombinante.

Poiché la GST si piega rapidamente in una proteina stabile e altamente solubile dopo la traduzione, l'inclusione del tag GST spesso promuove una maggiore espressione e solubilità delle proteine ricombinanti rispetto all'espressione senza tag. Inoltre, le proteine di fusione etichettate con GST possono essere purificate o rilevate in base alla capacità della GST (un enzima) di legarsi al suo substrato, il glutatione (GSH).

La cromatografia di affinità utilizzando glutathione-agarosio consente una purificazione rapida, delicata, non denaturante e altamente selettiva delle proteine contenenti sequenze di legame al glutatione, come Glutatione S-Transferasi (GST), glutatione perossidasi e glicossilasi I.

L'eluzione della proteina etichettata con GST viene effettuata con glutatione libero nel tampone di eluzione. L'affinità della Glutatione S-Transferasi per il glutatione libero è maggiore rispetto a quella per il glutatione immobilizzato legato alla matrice di agarosio. Pertanto, il glutatione libero sostituisce il glutatione immobilizzato, portando al rilascio della proteina etichettata con GST dalla matrice.