Sequenziamento di nuova generazione (NGS)

Sequenziamento di nuova generazione (NGS)

Il sequenziamento di nuova generazione (NGS), noto anche come sequenziamento ad alta produttività, è un termine generico utilizzato per descrivere diverse tecnologie di sequenziamento moderne, tra cui:
  • sequenziamento Illumina® (Solexa)
  • Sequenziamento Roche 454
  • Ion torrent: Sequenziamento Proton / PGM
  • Sequenziamento SOLiD
Queste recenti tecnologie ci permettono di sequenziare il DNA e l'RNA in modo molto più rapido ed economico rispetto al sequenziamento Sanger usato in precedenza, e come tali hanno rivoluzionato lo studio della genomica e della biologia molecolare
 
I metodi di sequenziamento del DNA di nuova generazione prevedono tre fasi generali:
 
  • Preparazione della libreria: le librerie vengono create utilizzando una frammentazione casuale del DNA, seguita da una legatura con linker personalizzati.
  • Amplificazione: la libreria viene amplificata utilizzando metodi di amplificazione clonale e PCR.
  • Sequenziamento: Il DNA viene sequenziato usando uno dei diversi approcci
La tecnologia di sequenziamento di nuova generazione (NGS) Illumina® utilizza l'amplificazione clonale e la chimica di sequenziamento per sintesi (SBS) per consentire un sequenziamento rapido e accurato. Il processo identifica simultaneamente le basi del DNA mentre le incorpora in una catena di acidi nucleici. Ogni base emette un segnale fluorescente unico quando viene aggiunta al filamento in crescita, che viene utilizzato per determinare l'ordine della sequenza di DNA.
La tecnologia NGS può essere utilizzata per sequenziare il DNA di qualsiasi organismo, fornendo informazioni preziose in risposta a quasi tutte le domande biologiche. Una tecnologia altamente scalabile, il sequenziamento del DNA può essere applicato a piccole regioni mirate o all'intero genoma attraverso una varietà di metodi, consentendo ai ricercatori di indagare e comprendere meglio la salute e la malattia.