Les anticorps anti-souris conjugués à la phosphatase alcaline (AP) sont des réactifs d’immunodétection couplés à une enzyme, conçus pour détecter avec sensibilité les immunoglobulines et les antigènes murins dans les immunoanalyses. Comme les autres réactifs dirigés contre des espèces et conjugués à une enzyme, ces produits sont principalement des anticorps secondaires : il s’agit d’immunoglobulines anti-souris produites chez une autre espèce hôte, le plus souvent la chèvre, le lapin, le mouton ou l’âne, puis liées de manière covalente à la phosphatase alcaline. Ils se lient aux anticorps primaires murins ou aux immunoglobulines de souris présentes dans un échantillon et permettent la génération d’un signal enzymatique pour la détection. Les anticorps primaires conjugués à la phosphatase alcaline sont couramment utilisés dans des techniques reposant sur une réaction enzymatique, notamment le Western blot, l’ELISA et l’immunohistochimie. La détection repose sur l’utilisation de substrats de la phosphatase alcaline générant un signal chimioluminescent ou colorimétrique.
Applications
Les anticorps anti-souris conjugués à la phosphatase alcaline sont validés pour un large éventail d’applications en immunoanalyse.
ELISA. Ces conjugués sont largement utilisés comme réactifs secondaires de détection dans les dosages immuno-enzymatiques ELISA. Le conjugué anti-IgG de souris (chaînes lourdes et légères, H&L) produit chez la chèvre et couplé à la phosphatase alcaline est recommandé pour l’ELISA à une dilution de 1/15 000. Les antisérums conjugués à la phosphatase alcaline permettent une détection particulièrement sensible et pratique des virus murins étudiés par ELISA, en utilisant comme substrat le p-nitrophényl phosphate, qui produit un composé réactionnel jaune soluble dans l’eau. Dans un protocole type, la dilution appropriée des immunoglobulines anti-souris conjuguées à la phosphatase alcaline est préparée dans un tampon de conjugaison, puis ajoutée dans chaque puits.
Western blot. Les conjugués à la phosphatase alcaline sont utilisés avec des substrats chimioluminescents ou colorimétriques pour détecter les protéines murines transférées sur une membrane. Selon le produit et les conditions expérimentales, les dilutions recommandées pour le Western blot varient de 1/500 à 1/20 000. Une limite de détection de 4 ng/mL a été rapportée pour les IgG de souris avec des conjugués à la phosphatase alcaline.
Immunohistochimie. Les anticorps anti-souris conjugués à la phosphatase alcaline conviennent au marquage immunohistochimique de coupes tissulaires congelées ou incluses en paraffine. Les dilutions de travail sont généralement comprises entre 1/200 et 1/20 000, selon le produit et le protocole utilisé.
Immunocytochimie et cytométrie en flux. L’anticorps secondaire anti-IgG de souris produit chez l’âne et conjugué à la phosphatase alcaline convient à la microscopie immunologique et à la cytométrie en flux. L’anticorps anti-IgA, IgG et IgM de souris produit chez la chèvre et conjugué à la phosphatase alcaline reconnaît les chaînes lourdes et légères des IgM, des sous-classes d’IgG murines IgG1, IgG2a, IgG2b et IgG3, ainsi que des IgA murines, comme démontré par ELISA, FLISA et/ou cytométrie en flux.
ELISPOT et FLISA. Les anticorps anti-souris conjugués à la phosphatase alcaline sont également validés pour les applications ELISPOT et les immunodosages fluorescents, notamment pour la détection des IgE murines et des chaînes légères kappa.