Les anticorps anti-singe conjugués à la peroxydase de raifort (HRP) sont des immunoréactifs couplés à une enzyme, conçus pour détecter avec une grande sensibilité les immunoglobulines et les antigènes de primates non humains (NHP) dans les immunoanalyses. Comme les autres réactifs anti-singe conjugués à des enzymes, ces produits sont des anticorps secondaires : il s’agit d’immunoglobulines anti-singe produites chez une espèce hôte différente, le plus souvent la chèvre, le lapin ou la souris, puis liées de manière covalente à la HRP. Ces anticorps se lient aux anticorps primaires de singe ou aux immunoglobulines de singe présentes dans un échantillon et génèrent un signal enzymatique permettant leur détection. La HRP demeure le marqueur enzymatique le plus couramment utilisé dans les immunoanalyses en raison de sa cinétique de réaction rapide, de son activité catalytique élevée et de sa compatibilité avec une large gamme de substrats chromogènes et chimiluminescents.
L’enzyme HRP
La peroxydase de raifort (EC 1.11.1.7) est une oxydoréductase contenant un groupe hème, extraite de la racine d’Armoracia rusticana (raifort). Cette enzyme catalyse l’oxydation d’une grande variété de substrats organiques et inorganiques en utilisant le peroxyde d’hydrogène (H₂O₂) comme accepteur d’électrons. La HRP est une glycoprotéine d’une masse moléculaire d’environ 44 kDa, dont le site actif contient un groupe prosthétique hème constitué de protoporphyrine IX. Une unité d’activité enzymatique est définie comme la quantité d’enzyme qui décompose une micromole de peroxyde d’hydrogène par minute à 25 °C et à pH 7,0.
Le mécanisme catalytique de la HRP repose sur un cycle en deux étapes. Au cours de la première étape, l’enzyme à l’état ferrique réagit avec le H₂O₂ pour former le composé I, une espèce oxoferryle associée à un radical cation du cycle porphyrinique. Au cours de la deuxième étape, le composé I oxyde un substrat réducteur pour former le composé II. Celui-ci est ensuite réduit à l’état ferrique de repos par une seconde molécule de substrat. La constante de vitesse de formation du composé I est influencée par un groupement ionisable dont le pK est d’environ 4. Les paramètres cinétiques varient selon les isoenzymes de la HRP.
