Les anticorps primaires anti-singe conjugués à la phycoérythrine (PE) sont des immunoréactifs fluorescents qui associent l’intense fluorescence de la R-phycoérythrine (R-PE), une phycobiliprotéine, à la spécificité de reconnaissance des immunoglobulines dirigées contre les antigènes de primates non humains (NHP). Ces réactifs sont largement utilisés en cytométrie en flux, en tri cellulaire par cytométrie en flux (FACS) et pour l’immunophénotypage multiparamétrique des sous-populations leucocytaires chez le singe. Ils permettent la détection sensible des marqueurs de surface cellulaire et des immunoglobulines dans le cadre de la recherche préclinique, du développement de vaccins et de la médecine translationnelle. Les anticorps conjugués à la PE présentent une fluorescence intense et stable, une sensibilité élevée, une faible fluorescence de fond et une bonne résistance à l’extinction de fluorescence. Ils conviennent aussi bien aux applications de cytométrie en flux qu’à l’imagerie et présentent, selon le texte source, une photostabilité supérieure à celle d’autres conjugués.
Le fluorophore PE
La R-phycoérythrine est une phycobiliprotéine oligomérique de grande taille, isolée des algues rouges, dont la masse moléculaire est d’environ 240 000 daltons. La molécule de PE native est composée de trois types de sous-unités : alpha (20 000 Da), bêta (20 000 Da) et gamma (30 000 Da). La sous-unité alpha contient uniquement le chromophore phycoérythrobiline (PEB), tandis que les sous-unités bêta et gamma contiennent à la fois des chromophores PEB et phycourobiline (PUB). Les variations des spectres d’absorption de la PE selon les espèces reflètent les différences du rapport PEB/PUB au sein des sous-unités. Cette protéine est soluble en milieu aqueux et présente une faible liaison non spécifique. La PE et la B-phycoérythrine (B-PE), une phycobiliprotéine apparentée, figurent parmi les phycobiliprotéines les plus fluorescentes, avec des rendements quantiques qui dépasseraient probablement 90 %. Leur fluorescence orange est facilement visible à l’œil nu dans toute solution présentant une concentration suffisamment élevée. L’organisation spatiale des chromophores de type bilin au sein de la protéine limite l’extinction de fluorescence liée à la concentration et assure une protection stérique qui contribue à rendre la fluorescence relativement indépendante du pH. La PE est purifiée à partir d’algues rouges. Dans ces organismes, elle joue un rôle important dans la capture de la lumière et le transfert de l’énergie lumineuse au cours de la photosynthèse.
