Les anticorps primaires anti-humains biotinylés sont des immunoréactifs conçus pour amplifier le signal grâce aux systèmes de détection avidine-biotine. Produits après immunisation d’animaux hôtes tels que la chèvre, le lapin, la souris ou le rat avec des immunoglobulines humaines purifiées ou des protéines humaines spécifiques, ces anticorps sont purifiés par affinité puis conjugués chimiquement à la biotine, une vitamine hydrosoluble présentant une affinité exceptionnellement élevée pour la streptavidine (Kd ≈ 10⁻¹⁴ M) et l’avidine. Le processus de conjugaison introduit généralement 3–6 molécules de biotine par molécule d’anticorps via une chimie utilisant des esters de NHS ciblant les amines primaires des résidus de lysine, formant des liaisons amide stables qui résistent au clivage dans les conditions standard des essais. La faible masse moléculaire de la biotine (244 Da) limite les interférences avec l’affinité et la spécificité de liaison à l’antigène. Les spécificités disponibles comprennent les anticorps anti-IgG humaine (H+L), anti-IgG humaine (Fc), anti-IgG humaine (Fab), les réactifs spécifiques des isotypes (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgM, IgE, IgD), les anticorps dirigés contre les marqueurs CD humains (CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD25, CD45, etc.), les cytokines (IL-2, IL-4, IL-6, IFN-γ, TNF-α) ainsi que les protéines de signalisation. Une adsorption croisée étendue contre les protéines sériques de souris, de rat, de lapin, de chèvre et de bovin élimine les liaisons non spécifiques dans les échantillons provenant de plusieurs espèces.

Applications

Les anticorps anti-humains biotinylés sont utilisés dans de nombreux formats d’immunoessais nécessitant une amplification du signal. En ELISA, le système biotine-streptavidine-peroxydase permet une amplification importante du signal (5 à 10 fois), facilitant la détection de cytokines humaines, d’anticorps et de biomarqueurs pathologiques présents à faible abondance dans le sérum, le plasma ou les surnageants de cultures cellulaires. En immunohistochimie et en immunocytochimie, les anticorps biotinylés suivis de conjugués streptavidine-HRP ou streptavidine-phosphatase alcaline produisent un marquage intense permettant de visualiser les antigènes dans des tissus humains fixés au formol et inclus en paraffine ou dans des cellules cultivées. En Western blot, ces anticorps permettent une détection chimiluminescente sensible lorsqu’ils sont associés à la streptavidine-HRP et à des substrats à base de luminol. Les essais d’immunoprécipitation et de capture (« pull-down ») bénéficient des réactifs biotinylés pour une capture efficace des antigènes à l’aide de billes magnétiques ou de résines d’agarose conjuguées à la streptavidine. En cytométrie en flux, les anticorps biotinylés associés à la streptavidine-PE ou à la streptavidine-APC permettent une amplification du signal pour la détection de marqueurs de surface humains faiblement exprimés. Les autres applications comprennent les microarrays tissulaires, les dot blots, l’hybridation in situ et les essais multiplex Luminex®. Les dilutions de travail dépendent de l’application : 1:500–1:10 000 pour l’ELISA, 1:100–1:1 000 pour l’immunohistochimie et 1:1 000–1:20 000 pour le Western blot. Ces réactifs sont destinés exclusivement à la recherche et ne sont pas destinés aux procédures diagnostiques.