Les kits de détection ABC (complexe avidine-biotine) s'appuient sur la forte affinité entre les molécules d'avidine et de biotine pour amplifier les signaux d'immunodétection. Lors de la détection d'anticorps de lapin, un anticorps secondaire biotinylé spécifique à l'IgG de lapin se lie à l'anticorps primaire fixé à l'antigène. Cette étape est suivie de l'ajout d'un complexe avidine-enzyme, dans lequel l'avidine conjuguée à la phosphatase alcaline se lie à la biotine, créant ainsi un complexe macromoléculaire stable et hautement sensible

Amplification et développement du signal

La phosphatase alcaline est une enzyme capable de catalyser la déphosphorylation de substrats chromogènes spécifiques tels que le BCIP/NBT ou le Fast Red. Dans ce système, l'activité enzymatique entraîne le dépôt d'un précipité coloré insoluble au niveau des sites antigéniques dans les tissus ou les cellules, qui peut ensuite être visualisé au microscope. Cette réaction est très sensible et permet une localisation précise des cibles liées aux anticorps de lapin.

Applications et polyvalence

Le système ABC-AP pour anticorps de lapin est largement utilisé en immunohistochimie (IHC), immunocytochimie (ICC), western blot, ELISA et hybridation in situ. Il est particulièrement avantageux pour les échantillons présentant une activité peroxydase endogène élevée, où la phosphatase alcaline offre une alternative plus fiable à la détection à base de peroxydase de raifort. Cette méthode permet la détection dans les tissus fixés au formol et inclus dans la paraffine, les coupes congelées et diverses préparations cytologiques.

Avantages des kits Rabbit ABC-AP

• Haute sensibilité : plusieurs molécules de phosphatase alcaline conjuguées à l'avidine amplifient le signal, ce qui améliore la détection des cibles peu abondantes.

• Faible bruit de fond : l'avidine modifiée réduit les liaisons non spécifiques, ce qui permet d'obtenir des résultats plus clairs avec moins de bruit de fond.

• Flexibilité des substrats : une gamme de substrats chromogènes peut être utilisée pour créer des réactions colorées distinctes, y compris des options pour la coloration multiplexe.

• Compatibilité : la nature modulaire permet la combinaison avec différents anticorps primaires ou sondes biotinylées pour répondre à divers besoins expérimentaux.

Aperçu général du protocole

Les protocoles types comprennent la préparation et la fixation des échantillons, le blocage de l'activité de la phosphatase alcaline endogène afin de réduire le signal de fond, l'application de l'anticorps primaire de lapin, l'incubation avec un anticorps secondaire anti-lapin biotinylé, l'ajout d'un complexe avidine-phosphatase alcaline et le développement avec des substrats chromogènes. Le temps de réaction et le choix du substrat peuvent être optimisés en fonction des exigences de l'échantillon et du test.