Les anticorps primaires anti-souris biotinylés sont des immunoglobulines qui se lient directement à des antigènes spécifiques de souris (par exemple, CD3, CD4, CD8, CD90 et F4/80) et portent un groupement biotine (vitamine B7, 244 Da) lié de manière covalente. Contrairement aux anticorps secondaires biotinylés, qui reconnaissent les immunoglobulines de souris, les anticorps primaires biotinylés permettent un marquage en une seule étape, suivi d’une détection reposant sur la streptavidine, sans nécessiter de réactif secondaire.
La biotine constitue un site de liaison à haute affinité pour les molécules rapporteurs conjuguées à la streptavidine ou à l’avidine, exploitant l’une des interactions non covalentes les plus fortes connues en biologie (Kd ≈ 10⁻¹⁵ M). Ce système permet une amplification du signal, car plusieurs molécules de streptavidine couplées à un marqueur peuvent se lier à chaque anticorps biotinylé, assurant ainsi une détection sensible des antigènes murins. Les anticorps primaires biotinylés sont particulièrement utiles dans les panels expérimentaux où les réactifs secondaires doivent être évités, notamment en cytométrie en flux multiparamétrique ou dans les applications nécessitant de limiter le bruit de fond lié aux immunoglobulines endogènes.
Applications
Cytométrie en flux et tri cellulaire. Ces anticorps sont utilisés avec des conjugués streptavidine-fluorophore (par exemple, streptavidine-PE ou streptavidine-APC) pour l’immunophénotypage des sous-populations de leucocytes murins.
Immunohistochimie et immunocytochimie. Les anticorps primaires biotinylés permettent l’amplification du signal dans les systèmes de détection utilisant la streptavidine-biotine marquée (LSAB, *Labeled Streptavidin-Biotin*). L’anticorps biotinylé anti-CD90 de souris (clone 30-H12) est validé pour la cytométrie en flux et l’immunohistochimie.
Western blot. Ces anticorps sont utilisés avec la streptavidine conjuguée à la peroxydase de raifort (streptavidine-HRP) et des substrats chimioluminescents pour détecter les protéines murines immobilisées sur des membranes.
ELISA. Ils servent de réactifs de détection dans les formats ELISA sandwich destinés à quantifier des analytes murins.
Études de blocage et études fonctionnelles. Certains clones présentent une activité fonctionnelle.