La fosfofructocinasa (PFK) es una enzima reguladora clave en la glucólisis, que cataliza la conversión de fructosa-6-fosfato a fructosa-1,6-bisfosfato. La medición precisa de la actividad de la PFK es esencial para estudiar el metabolismo energético celular y su desregulación en enfermedades como el cáncer y los trastornos metabólicos.

Rol biológico de la fosfofructocinasa

La PFK cataliza la fosforilación de fructosa-6-fosfato utilizando ATP, produciendo fructosa-1,6-bisfosfato y ADP, un paso esencialmente irreversible que compromete la glucosa a la glucólisis. Esta reacción está altamente regulada por efectores alostéricos, incluyendo ATP (inhibidor), AMP (activador) y fructosa-2,6-bisfosfato, este último siendo un potente activador que vincula la glucólisis con señales hormonales y nutricionales. La PFK existe en múltiples isoformas (PFK-M, PFK-L, PFK-P), lo que refleja las demandas metabólicas específicas de los tejidos.

Principio y metodología del ensayo

Los kits de ensayo de actividad de PFK generalmente emplean una reacción enzimática acoplada. La PFK convierte fructosa-6-fosfato y ATP en fructosa-1,6-bisfosfato y ADP. El ADP producido se procesa más por una mezcla enzimática para generar AMP y NADH. La disminución de NADH se monitorea colorimétricamente, usualmente a 340 nm, o via la formación de un producto coloreado con fuerte absorbancia a 450 nm. Esto permite una detección cuantitativa y sensible de la actividad de la PFK en diversas muestras biológicas, incluyendo suero, plasma, tejidos y células cultivadas.

Aplicaciones en investigación y diagnóstico

• Estudios metabólicos: Los ensayos de actividad de PFK se utilizan ampliamente para evaluar el flujo glucolítico y el metabolismo energético en la salud y la enfermedad.
• Diagnóstico de enfermedades: La deficiencia de actividad de PFK está asociada con la enfermedad de almacenamiento de glucógeno tipo VII (enfermedad de Tarui), mientras que la actividad elevada está vinculada a la proliferación celular del cáncer.
• Cribado de fármacos: Estos ensayos son valiosos en el cribado de compuestos que modulan la glucólisis, con implicaciones para la investigación sobre el cáncer y el síndrome metabólico.

Características del kit de ensayo

• Sensibilidad: Detección a baja concentración, lo que permite el análisis de muestras con baja abundancia.
• Rapidez: Los tiempos de ensayo varían de 15 a 30 minutos, facilitando estudios de alto rendimiento.
• Versatilidad de muestras: Compatible con una amplia gama de tipos de muestras, incluyendo tejidos animales y células cultivadas.
• Precisión: Baja variabilidad intra- e interensayo garantiza reproducibilidad.

Los kits de ensayo de actividad de fosfofructocinasa proporcionan una forma robusta, sensible y rápida de investigar un punto regulador central en el metabolismo intermedio. Su aplicación abarca la investigación metabólica básica, el diagnóstico de enfermedades y el descubrimiento de fármacos, subrayando la importancia de la enzima en la fisiología y patología celular.