Resinas de afinidad para proteínas etiquetadas con GST
La Glutatión S-transferasa (GST) es una proteína de 211 aminoácidos (26 kDa) cuya secuencia de ADN se integra con frecuencia en vectores de expresión para la producción de proteínas recombinantes. El resultado de la expresión de este vector es una proteína de fusión etiquetada con GST, en la que la proteína funcional GST (26 kDa) se fusiona al extremo N-terminal de la proteína recombinante.
Debido a que GST se pliega rápidamente en una proteína estable y altamente soluble tras la traducción, la inclusión de la etiqueta GST suele promover una mayor expresión y solubilidad de las proteínas recombinantes en comparación con la expresión sin la etiqueta. Además, las proteínas de fusión etiquetadas con GST pueden ser purificadas o detectadas en función de la capacidad de la GST (una enzima) para unirse a su sustrato, el glutatión (GSH).
La cromatografía de afinidad utilizando glutathiona-agarosa permite una purificación rápida, suave, no desnaturalizante y altamente selectiva de proteínas que contienen secuencias de unión al glutatión, como la Glutatión S-Transferasa (GST), la glutatión peroxidasa y la glicoxalasa I.
La elución de la proteína etiquetada con GST se realiza con glutatión libre en el tampón de elución. La afinidad de la Glutatión S-Transferasa por el glutatión libre es mayor que por el glutatión inmovilizado unido a la matriz de agarosa. Por lo tanto, el glutatión libre reemplaza el glutatión inmovilizado, lo que conduce a la liberación de la proteína etiquetada con GST de la matriz.
