Electroforesis de proteínas es una técnica de electroforesis en gel que permite el análisis de una mezcla de proteínas. El gel utilizado está compuesto por acrilamida, que polimeriza para formar una red de malla. La electroforesis en gel permite separar las proteínas para su análisis y se basa en la capacidad de las proteínas cargadas para migrar a través de la malla de un gel cuando se aplica una corriente eléctrica.
El análisis de una mezcla por electroforesis en gel se realiza en proteínas desnaturalizadas, es decir, proteínas que han perdido sus estructuras terciaria y secundaria. Un detergente aniónico cubre las cadenas poliméricas desnaturalizadas, dándoles una carga (relación carga constante/aminoácido). Las proteínas individuales en una mezcla compleja quedan así recubiertas con cargas negativas. Cuando se aplica un voltaje continuo entre los extremos de un gel que contiene la mezcla de proteínas, las proteínas migran a través de las mallas del gel.
Principios de Separación
- Peso Molecular: La malla del gel retiene más las moléculas grandes que las pequeñas. Las moléculas de menor peso molecular migran más rápido a través del gel.
- Densidad del Gel: La resolución de separación se puede ajustar utilizando geles con diferentes densidades de malla.
- Marcador de Peso Molecular: Se utiliza durante la migración para proporcionar una escala de referencia, permitiendo determinar el tamaño de cada proteína.
Visualización de Proteínas
Después de la migración, las proteínas se visualizan utilizando tinciones específicas. La tinción más comúnmente utilizada es el azul Coomassie, pero también es posible la tinción con plata. Los marcadores de peso molecular ayudan a determinar el tamaño de las proteínas en la mezcla.
