Hibridación in situ fluorescente (FISH) es una técnica citogenética molecular fundamental que permite la detección y localización de secuencias específicas de ADN en cromosomas, facilitando un análisis genético preciso en entornos de investigación y clínicos.
Principios de FISH
FISH implica el uso de sondas de ADN o ARN marcadas con fluorescencia que son complementarias a las secuencias de interés. Estas sondas se desnaturalizan y luego se hibridan con ADN cromosómico desnaturalizado o núcleos fijados en portaobjetos microscópicos. Una vez que ocurre la unión (hibridación), los portaobjetos se lavan para eliminar las sondas sobrantes, y las sondas hibridadas se visualizan mediante microscopia de fluorescencia. Los sitios de hibridación específicos aparecen como señales brillantes, correspondientes a la ubicación de las secuencias de ADN objetivo.
Aplicaciones en citogenética
FISH ha revolucionado el análisis citogenético al ofrecer ventajas únicas sobre las técnicas de bandeo tradicionales:
- Detección de anomalías numéricas y estructurales: Permite la identificación de deleciones, duplicaciones, inversiones, translocaciones y aneuploidías en células tanto en metafase como en interfase.
- Diagnóstico oncológico: Utilizado en la detección y caracterización de cambios cromosómicos asociados con malignidades hematológicas y tumores sólidos, incluso en muestras no aptas para cariotipado convencional, como tejidos fijados en formalina e incluidos en parafina.
- Diagnóstico prenatal y postnatal: Permite una evaluación rápida de anomalías cromosómicas en células fetales obtenidas de amniocentesis o muestreo de vellosidades coriónicas.
- Mapeo genético y organización del genoma: Facilita la asignación de genes a ubicaciones cromosómicas específicas.
- Detección de microdeleciones y reordenamientos crípticos: Identifica cambios submicroscópicos no detectables mediante análisis de cariotipo estándar.
Ventajas clave
Puede realizarse en células no divididas (en interfase), lo que permite el análisis de muestras inaccesibles para la citogenética estándar.
Permite el uso simultáneo de múltiples sondas fluorescentes, proporcionando una imagen multicolor detallada de varios objetivos dentro de una sola célula.
Alta sensibilidad y especificidad para secuencias objetivo.
Hibridación in situ fluorescente sigue siendo un estándar de oro para el análisis citogenético dirigido, ofreciendo alta resolución, flexibilidad y valor diagnóstico que continúa ampliando los límites de la investigación genómica y la medicina personalizada.
